Thewellbio應用3D培養技術可以實現體外研究細胞在體內的行為與對刺激的反應，如溫度、pH變化、營養吸收、轉運及分化等。公司研發供應的細胞體外3D培養體系采用無動物源成分的多糖凝膠材料，模擬出天然的細胞胞外基質環境，同時具有多用途、高精度、高性價比、操作簡便和節省時間等特點。因此3D培養技術越來越多地被應用到藥物篩選、組織工程、臨床前研究、細胞治療和基礎研究等領域。

對于*次使用VitroGel 3D系統，請閱讀這些常見問題，以確保*效果。

1.我應該選擇哪種產品，VitroGel 3D或VitroGel 3D-RGD？

如果您使用貼壁細胞系，建議您使用VitroGel 3D-RGD。如果您使用非貼壁細胞系，或者您想要更靈活地控制生長因子/蛋白質，我們建議您使用VitroGel 3D。請support@thewellbio.com如果你需要一個定制的產品。

2.產品有多穩定？

VitroGel 3D在4-40°C之間是穩定的。請勿將產品冷凍或將水凝膠溶液加熱至80°C以上。該產品在室溫下4℃或6個月未開封未開封18個月。一旦打開，請密封蓋子，保持在4°C，以防止1個月內污染和使用。

3.如何調整水凝膠形成時間并作為可注射水凝膠進行準備？

水凝膠形成時間高度取決于水凝膠溶液和觸發溶液（細胞培養基/PBS）的混合比例。我們建議將水凝膠溶液和介質/ PBS以4：1（v / v）的比例混合成可注射的水凝膠。水凝膠在混合后30分鐘內應穩定。較高的混合比（水凝膠溶液：介質> 4：1）會導致更長的水凝膠形成時間。低混合比（水凝膠溶液：介質<1：1）可能導致不可注射的水凝膠。

4.水凝膠形成速度太快，我該怎么辦？

水凝膠形成時間取決于幾個因素，如凝膠濃度，培養基的離子強度和混合比。如果水凝膠形成太快，我們建議用DI水稀釋水凝膠溶液，然后與細胞培養基混合使其凝膠化。稀釋后，嘗試保持4：1的比例（稀釋的水凝膠溶液：細胞培養基= 4：1）進行混合，因為這是我們用于我們的水凝膠系統的大多數培養基的*比例。

5.當將凝膠溶液與細胞培養基混合時，我可以做什么來保持氣泡形成？

氣泡問題與將凝膠溶液與細胞培養基混合后溶液粘度增加有關。這里有一些有助于減少氣泡形成的建議：
1）將水凝膠溶液預熱至37°C以降低凝膠溶液的粘度。
2）將凝膠溶液和細胞培養基輕輕混合，并沿著孔板的壁緩慢移液，不引入氣泡。（有些用戶喜歡使用渦流而不是移液管進行混合以避免氣泡）
3）在與細胞培養基混合之前用DI水稀釋凝膠溶液。
4）切割移液器吸頭以獲得更好的流量。
5）如果混合后僅形成小氣泡，在水凝膠頂部加入一層培養基，孵育過夜。

6.如何調整zui終水凝膠的硬度？

通過在與細胞培養基/PBS混合之前稀釋水凝膠溶液可以調節zui終水凝膠的硬度。請使用無菌去離子水稀釋水凝膠溶液。不要使用PBS或其他離子溶液。如果您需要比原始產品更高的水凝膠剛度，請與我們。

7.應該使用什么種子密度？

我們建議對該水凝膠系統使用200,000-1,000,000個細胞/ mL。您可能需要相應地每1-2天更換一次覆蓋的培養基。

8.細胞在VitroGel 3D水凝膠中生長多長時間？

我們已經測試了水凝膠系統中細胞的生長長達兩周。依靠細胞系，3D細胞培養可以持續更長時間。一旦單元格的數量和大小增加，您可能需要更頻繁地更換封面介質。

10.球形形成前多久？

通常，球形體形成在水凝膠體系中培養約5-10天。形成時間可以根據細胞系而變化。

11.3D文化后，我能從水凝膠中收獲細胞么？

是的，通過使用簡單的移液和離心方案，可以在3D培養后收獲細胞。請下載完整的使用手冊，并閱讀從水凝膠收集細胞的細節。

12.為什么水凝膠松散地粘到未處理的組織培養板上？

未處理的組織培養板具有更疏水的表面，其減少了孔板表面上的水凝膠/細胞的附著。為了更好的表現，我們建議使用經過處理的組織培養板與VitroGel 3D系統。

13.膠凝是否可逆？

是。如果水凝膠以適當的混合比制備，例如 4：1（水凝膠溶液：細胞培養基= 4：1），水凝膠將進行特殊的可逆機械性能 - 剪切稀化和自愈，這意味著水凝膠可以在剪切力下轉移到液體中，例如移液或一旦剪切力停止，再次注入和恢復為水凝膠。除了這種機制，我們還可以操縱水凝膠對溫度變化或其他方法是可逆的。請support@thewellbio.com獲取定制解決方案。

14.在VitroGel 3D中生長的細胞是否可以分化？

是。通過使用新鮮的VitroGel 3D或其他2D或3D培養方法，可以從VitroGel 3D水凝膠系統和亞培養物中再次收獲細胞一段時間。

15如何使用VitroGel 3D進行共培養或夾心培養（逐層）？

可以使用VitroGel 3D水凝膠系統進行兩種或多種不同細胞類型的共培養。除了添加不同的細胞類型與水凝膠溶液共同培養，每種細胞類型也可以與水凝膠溶液混合并逐層加入。在*層水凝膠變得穩定后，仔細地將第二層細胞/水凝膠混合物覆蓋在*層細胞/水凝膠的頂部。

16.我可以將細胞外基質蛋白或其他分子化合物添加到VitroGel 3D水凝膠中嗎？

是。細胞外基質蛋白或其他分子化合物可以在水凝膠形成之前或之后加入到VitroGel 3D水凝膠體系中。在水凝膠形成之前，將蛋白質或分子化合物加入細胞培養基中，然后與VitroGel 3D水凝膠溶液混合。在形成水凝膠之后，可以將蛋白質或分子化合物加入滲透到納米纖維基質中的水凝膠的頂部。請注意，由于蛋白質或化學化合物中含有的鹽，水凝膠形成時間和zui終凝膠硬度可能會發生變化。如果改變水凝膠性質，我們建議在與VitroGel 3D水凝膠溶液混合之前用蔗糖溶液洗滌蛋白質或化合物以除去鹽。

17.VitroGel 3D是否與共焦顯微鏡或其他成像技術的染色和免疫熒光方案相兼容？

是。細胞可以在水凝膠內染色或從水凝膠中收獲，然后染色。大多數熒光染料和免疫試劑可以用于標準方案。請閱讀VitroGel 3D的完整使用手冊了解更多詳情。此外，VitroGel 3D水凝膠在不同的成像系統中是透明和兼容的，用于細胞觀察。

18.我可以對在VitroGel 3D中培養的細胞的蛋白質和核酸進行分子分析嗎？

是。在VitroGel 3D水凝膠中培養后，可以從水凝膠中收獲細胞，并根據標準程序進行分子分析。

19.水凝膠是否可以從組織培養中撤出，以進行切片？

是的，一旦水凝膠變得穩定，你可以把它從文化中分離出來。添加*培養基后30-60分鐘內水凝膠應穩定。

20.我可以使用VitroGel 3D進行體內研究嗎？

是。可以在水凝膠形成之前或之后注射VitroGel 3D用于體內研究。在水凝膠形成之前，可以將VitroGel 3D溶液直接注射到動物中，后者隨著其與生理環境的離子化合物接觸而變成水凝膠。此外，VitroGel 3D水凝膠在水凝膠形成后具有先進的注射性能。以適當的比例混合水凝膠溶液和細胞培養基/PBS（我們推薦水凝膠溶液：培養基/PBS = 4:1v / v），zui終的水凝膠變得可注射用于體內研究。使用這種方法，細胞或??其他化合物可以在注射前在水凝膠中很好地混合。

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